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          轉(zhuǎn)基因植物NOS終止子核酸檢測試劑盒試劑準(zhǔn)備

          2021年10月13日 14:20:10人氣:757來源:上海研生生化試劑有限公司

          轉(zhuǎn)基因植物NOS終止子核酸檢測試劑盒試劑準(zhǔn)備:


          1. DNA模板


          2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)


          3.10×PCR Buffer


          4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM


          5.Taq酶操作步驟 


          1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。


                10×PCR buffer             5μl


                dNTP mixl                 4μl


                 引物1(10pM)               2μl


                 引物2(10PM)              2μl


                 Taq酶(2U/μl)            1μl


                DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl


                加ddH2O至               50 μl


              視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。


          2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。


          3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。


          4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。

          細(xì)胞周期末期促進(jìn)復(fù)合蛋白APC1抗體

          磷酸化蛋白激酶B2抗體

          磷酸化鐵蛋白Fe65抗體

          磷酸化鐵蛋白Fe65抗體

          磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體

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          磷酸化活化復(fù)制因子2抗體

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          磷酸化細(xì)胞周期末期促進(jìn)復(fù)合蛋白APC1抗體

          發(fā)育分化增強(qiáng)因子1抗體

          磷酸化發(fā)育分化增強(qiáng)因子1抗體

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          ASH1蛋白抗體

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          血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移蛋白抗體

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          甘油酯激酶線粒體抗體

          磷酸化內(nèi)收蛋白a1抗體


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