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          實驗ELISA法大鼠腦組織提取操作步驟

          2017年03月07日 09:58:36人氣:3960來源:上海研生生化試劑有限公司

          1.TSZelisa試劑盒自行割取大鼠腦組織

          2.4℃預(yù)冷的PBS漂去組織血,濾紙吸干殘留的PBS;

          3.稱重,加入裂解液勻漿(在冰上);

          4.將得到的勻漿液用液氮反復(fù)凍融3次;

          5.室溫靜置30mins,4℃15000r/min離心1h,取上清,分裝,-80℃保存。

          TSZelisa試劑盒簡介:目的建立動物組織內(nèi)P53蛋白的免疫檢測分析方法,為P53生物藥物的代謝分布研究提供檢測手段。方法辣根過氧化物酶(HRP)標記抗P53蛋白單克隆抗體3P40,應(yīng)用標記后的抗體及重組P53蛋白的檢測,建立競爭性ELISA檢測方法;應(yīng)用此方法建立血清樣品中P53蛋白標準曲線,測定腹腔注射P53后不同時間大鼠血清中P53濃度。結(jié)果利用親和層析純化的3P40,進行HRP標記,ELISA檢測3P40HRP滴度可達1∶200 000;建立的競爭性ELISA方法可以檢測PBST中P53蛋白,靈敏度達30 ng/ml,日內(nèi)精密度較高,相對標準偏差(RSD)小于5%,體現(xiàn)較好的重復(fù)性;分別應(yīng)用正常大鼠血清、PBST稀釋的重組P53蛋白樣品進行競爭性ELISA檢測,結(jié)果顯示大鼠血清成分對P53蛋白檢測有一定的影響;應(yīng)用血清制備P53蛋白的標準曲線,檢測了腹腔注射P53蛋白后不同時間點大鼠血清樣品中的P53蛋白濃度。結(jié)論進行了抗P53單克隆抗體3P40的HRP標記,建立了競爭性ELISA方法,可用于P53蛋白藥物血藥濃度檢測。TSZelisa試劑盒樣本暫時不測應(yīng)在-80°冷凍保存,一般可以放置6個月左右,-20°可保存3個月,盡量避免反復(fù)凍融。

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