牛白血病抗體ELISA試劑盒檢查

  試劑盒的制備及評價利用純化的gp51重組蛋白作為包被抗原研制了gp51-ELISA試劑盒，試劑盒主要成分包括：已包被抗原的96孔板、HRP標(biāo)記的兔抗牛IgG和牛白血病陰性、陽性尺度血清。gp51重組蛋白的大量制備與純化將本實驗室已構(gòu)建成功的含PET-32a-gp51表達(dá)載體的菌株復(fù)蘇，在大腸桿菌BL21中大量誘導(dǎo)表達(dá)，收集菌體經(jīng)超聲波破碎，將包涵體通過Ni~(2+)親和層析柱進(jìn)行純化，透析復(fù)性后用PAGE電泳檢測，得到純度較高的gp51重組蛋白。紫外光分光光度計檢測，重組蛋白濃度為0.216mg/mL。對試劑盒進(jìn)行了特異性、敏捷度、重復(fù)性及保留期試驗，結(jié)果表明：試劑盒能特異地檢測牛白血病陽性尺度血清，與牛傳染性鼻氣管炎、藍(lán)舌病、牛病毒性腹瀉和赤羽病等陽性尺度血清均無交叉反應(yīng)；用該試劑盒對牛白血病陽性尺度血清進(jìn)行檢測，測定效價為1:256～1:512，敏捷度是AGIDT的4～8倍；重復(fù)性試驗，試劑盒批內(nèi)差異為1.35%～4.11%，批間差異為3.49%～9.54%,分別小于10%和15%；保留期試驗，試劑盒-20℃保留期為6個月，4℃保留期為1個月。

  本研究在原有的研究基礎(chǔ)之上展開，將已構(gòu)建并經(jīng)鑒定準(zhǔn)確的PET-32a-gp51表達(dá)菌株復(fù)蘇，在大腸桿菌BL21中大量誘導(dǎo)表達(dá),通過純化及復(fù)性后得到純度高、免疫學(xué)活性好的gp51重組蛋白，參照已建立的間接gp51-ELISA方法，以此重組蛋白研制了檢測牛白血病病毒抗體的間接gp51-ELISA試劑盒，并進(jìn)行了試劑盒的評價及初步應(yīng)用研究。地方流行性牛白血病(Enzootic Bovine leukosis,EBL)是由牛白血病病毒(Bovine leukemia virus,BLV)引起的以淋巴細(xì)胞持續(xù)性增生為特征的傳染性腫瘤性疾病,主要發(fā)生于4～8歲的成年牛。因此自主高水平的檢測試劑盒對該病的防制具有重要意義。目前我國使用的牛白血病檢測試劑幾乎全部來自國外，價格昂貴，檢測本錢很高。該病幾乎遍布*各養(yǎng)牛國家，在我國某些牛群中血清陽性率達(dá)30%～50%，已成為牛的重要傳染病之一。