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          單克隆抗體有限稀釋法

          2015年10月16日 10:18:31人氣:2186來(lái)源:上海研生生化試劑有限公司

              有限稀釋法對(duì)于篩選雜交瘤來(lái)說(shuō),是zui普通的方法,在許多實(shí)驗(yàn)室中都在使用。但是,作為相對(duì)舊的技術(shù),已經(jīng)不能滿足當(dāng)今的需求。方法自身具有許多缺點(diǎn):

          1、人工操作,操作及重復(fù)的步驟太多,不可避免容易出錯(cuò)。

          2、速度慢,效率低。只能保證30-40%的孔有細(xì)胞生長(zhǎng)。對(duì)于高通量篩選來(lái)說(shuō),不能滿足要求。

          3、不能保證單克隆,需要亞克隆3-4次,所以,人工和耗時(shí)都較多。

          4、有限稀釋在ELISA檢測(cè)前,并不知道哪一個(gè)克隆滿足抗原特異性的要求。所以,需要對(duì)所有克隆,都要zui少做一次ELISA鑒定。
           
              除了有限稀釋方法,現(xiàn)在相對(duì)先進(jìn)的細(xì)胞分選技術(shù)也得到普遍應(yīng)用。一般就是細(xì)胞分選儀或者流失細(xì)胞技術(shù)對(duì)雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行篩選。其原理是先將細(xì)胞分散開(kāi),沒(méi)有細(xì)胞結(jié)團(tuán)。通過(guò)在細(xì)胞表面或細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記熒光信號(hào)。當(dāng)單個(gè)細(xì)胞在壓力作用下單個(gè)通過(guò)玻璃毛細(xì)管的時(shí)候,儀器可以自動(dòng)檢測(cè)單個(gè)細(xì)胞的熒光信號(hào)強(qiáng)度。熒光信號(hào)強(qiáng)度反應(yīng)這個(gè)細(xì)胞的相應(yīng)抗體表達(dá)水平。zui后,將高熒光信號(hào)強(qiáng)度的細(xì)胞收集,再通過(guò)有限稀釋得到高水平表達(dá)的單克??;或者也可以使用單細(xì)胞收集器收集高水平表達(dá)的單個(gè)雜交瘤細(xì)胞

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