大鼠I型膠原（collagen I）elisa試劑盒使用說明書

大鼠I型膠原（collagen I）是以二氧化氯產(chǎn)品、甲醛自測盒和水質(zhì)快速檢測試劑盒為主營品種的應(yīng)用公司，是專業(yè)的消毒劑供應(yīng)商、環(huán)保產(chǎn)品的提供商，并兼顧精細化工類產(chǎn)品的銷售。目前公司的產(chǎn)品在食品、衛(wèi)生、防疫、醫(yī)療、養(yǎng)殖、種植、保鮮、工業(yè)循環(huán)水、自來水、純凈水及廢水處理等方面得到了廣泛應(yīng)用。

使用目的：
本大鼠I型膠原（collagen I）試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中I型膠原（collagen I）含量。
實驗原理
本大鼠I型膠原（collagen I）試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠I型膠原（collagen I）水平。用純化的大鼠I型膠原（collagen I）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入I型膠原（collagen I），再與HRP標(biāo)記的I型膠原（collagen I）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的I型膠原（collagen I）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準曲線計算樣品中大鼠I型膠原（collagen I）濃度。 
試劑盒組成 
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1瓶 8 標(biāo)準品（1600ug/L） 0.5ml×1瓶
3 酶標(biāo)包被板 12孔×8條 9 標(biāo)準品稀釋液 1.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張 
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個
標(biāo)本要求 
1．大鼠I型膠原（collagen I）標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標(biāo)準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
800 ug/L 5號標(biāo)準品 150μl的原倍標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液
400 ug/L 4號標(biāo)準品 150μl的5號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液
200 ug/L 3號標(biāo)準品 150μl的4號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液
100 ug/L 2號標(biāo)準品 150μl的3號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液
50 ug/L 1號標(biāo)準品 150μl的2號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：大鼠I型膠原（collagen I）用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 
4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。 
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。