研生試劑-人白三烯C4 ELISA試劑盒的組成

一、人白三烯C4 ELISA試劑盒試 劑 組 成
1、精密度微孔板Microtest Plates 96 wells            2、酶標偶合液Enzyme Conjugate   12.0ml
3、標準品Standard 　5 x 1.0ml                     4、呈色劑A、Substrate  A  6.0ml
5、呈色劑B、Substrate B  6.0ml                   6、終止液Stop Solution  6.0ml   
7、濃縮洗滌液（1：20）Rinsing Buffer 60.0ml        8、5倍樣品稀釋液  dilution 15.0m
二、注 意 事 項
人白三烯C4 ELISA試劑盒為體外檢測試劑，效期內使用，試劑應視為傳染物，不同總批號的試劑不能混用。
使用前應將盒內各試劑取出，室溫放置至少30分鐘。
保存于2-8℃，請勿冷凍，有效期請見盒內標示。
濃縮洗滌液出現(xiàn)結晶后，請于37℃孵育15分鐘
三、操 作 步 驟
每孔分別加入已稀釋的樣品、標準品各100ul。
將板置于37℃溫育30分鐘。
甩盡板中液體，用應用洗滌液進行洗滌，每次停留30秒，在紙上拍干。重復操作5次。
每孔加入酶標偶合液100ul。
將板置于37℃溫育30分鐘。
甩盡板中液體，用應用洗滌液進行洗滌，每次停留30秒，在紙上拍干。重復操作5次。
每孔加底物A、底物B各50 ul，置37℃恒溫箱反應15分鐘。
8．每孔加終止液50ul，于450nm波長讀O.D.值。
四、結 果 判 斷
儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值。
檢測值范圍：0 – 400pmol/L
人白三烯C4 ELISA試劑盒敏感度： 1.0 pmol/L

自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。
局限
6號標準品以上的結果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到的結果。
試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應。
3. 重復性：板內、板間變異系數(shù)均小于10%。
人肥大細胞類胰蛋白酶(MCT) ELISA試劑盒結 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的MCT標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的MCT含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。
3、檢測值范圍：0-4.0ng/ml
4、敏感度： 0.01 ng/ml