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          Anti-p-NFATc2/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化NFATc2抗體IgG

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          Anti-p-NFATc2/FITC??熒光素標(biāo)記磷酸化NFATc2抗體IgG

          標(biāo)記抗體(一抗)

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          蛋白質(zhì)與多肽的:
          多肽:通常由10~100氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫多肽,它們的分子量低于10,000Da(Dalton,道爾頓),能透過半透膜,不被三氯乙酸及硫酸銨所沉淀。也有文獻(xiàn)把由2~10個(gè)氨基酸組成的肽稱為寡肽(小分子肽);10~50個(gè)氨基酸組成的肽稱為多肽;由50個(gè)以上的氨基酸組成的肽就稱為蛋白質(zhì)。
          蛋白質(zhì):生物體中廣泛存在的一類生物大分子,由核酸編碼的α氨基酸之間通過α氨基和α羧基形成的肽鍵連接而成的肽鏈,經(jīng)翻譯后加工而生成的具有特定立體結(jié)構(gòu)的、有活性的大分子。是α—氨基酸按一定順序結(jié)合形成一條多肽鏈,再由一條或一條以上的多肽鏈按照其特定方式結(jié)合合而成的高分子化合物。
          就是:都是由20種基本氨基酸通過肽鍵連接而成的。
          多肽與蛋白質(zhì)的區(qū)別:
            蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)層次可簡寫為:C、H、O、N等元素→氨基酸→多肽(肽鏈)→蛋白質(zhì)。多肽與蛋白質(zhì)是不同的兩個(gè)層次,區(qū)別如下:
            ①多肽和蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)有差異。多肽僅僅是蛋白質(zhì)的初級結(jié)構(gòu)形式,而蛋白質(zhì)具有一定的空間結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)是由多肽和其他物質(zhì)結(jié)合而成的,一個(gè)蛋白質(zhì)分子可由一條肽鏈組成(如高等動(dòng)物的細(xì)胞色素c是由104個(gè)氨基酸殘基的一條肽鏈組成),也可由多條肽鏈通過一定的化學(xué)鍵(肯定不是肽鍵,如二硫鍵、氫鍵等)連接而成(如胰島素由2條肽鏈組成、胰凝乳蛋白酶是由3條肽鏈組成、血紅蛋白分子由4條肽鏈組成、免疫球蛋白分子由4條肽鏈組成等)。
           ?、诙嚯呐c蛋白質(zhì)的功能有差異。多肽往往是無生物活性,而蛋白質(zhì)是具有生物活性的。多肽一般無活性(如蛋白質(zhì)在胃、小腸中經(jīng)消化產(chǎn)生的多肽),少數(shù)有活性(如抗利尿激素就是多肽類激素),與蛋白質(zhì)相比,多肽的分子量較小,沒有空間結(jié)構(gòu),一般無活性;蛋白質(zhì)的分子量較大,有空間結(jié)構(gòu),有活性(變性后活性下降或消失,活性消失叫做失活)
            因此,一條剛從核糖體中合成的多肽鏈實(shí)際上不能稱為蛋白質(zhì)。
          多肽合成:
          是一個(gè)重復(fù)添加氨基酸的過程,固相合成順序一般從C端(羧基端)向 N端(氨基端)合成。過去的多肽合成是在溶液中進(jìn)行的稱為液相合成法。從1963年Merrifield發(fā)展成功了固相多肽合成方法以來,經(jīng)過不斷的改進(jìn)和完善,到今天固相法已成為多肽和蛋白質(zhì)合成中的一個(gè)常用技術(shù),表現(xiàn)出了經(jīng)典液相合成法*的優(yōu)點(diǎn),從而大大的減輕了每步產(chǎn)品提純的難度。多肽合成總的來說分成兩種:固相合成和液相多肽合成。
          標(biāo)記抗體:
             抗體經(jīng)過酶標(biāo)記、鐵蛋白標(biāo)記或通過膠體金標(biāo)記獲得標(biāo)記抗體,是免疫電鏡樣品制備的一種方法,用于觀察抗原抗體免疫復(fù)合物方面研究的手段。
          抗體結(jié)構(gòu):
            抗體是具有4條多肽鏈的對稱結(jié)構(gòu),其中2條較長、相對分子量較大的相同的重鏈(H鏈);2條較短、相對分子量較小的相同的輕鏈(L鏈)。鏈間由二硫鍵和非共價(jià)鍵聯(lián)結(jié)形成一個(gè)由4條多肽鏈構(gòu)成的單體分子。輕鏈有κ和λ兩種,重鏈有μ、δ、γ、ε和α五種。 整個(gè)抗體分子可分為恒定區(qū)和可變區(qū)兩部分。在給定的物種中,不同抗體分子的恒定區(qū)都具有相同的或幾乎相同的氨基酸序列??勺儏^(qū)位于"Y"的兩臂末端。在可變區(qū)內(nèi)有一小部分氨基酸殘基變化特別強(qiáng)烈,這些氨基酸的殘基組成和排列順序更易發(fā)生變異區(qū)域稱高變區(qū)。高變區(qū)位于分子表面,zui多由17個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成,少則只有2 ~ 3個(gè)。高變區(qū)氨基酸序列決定了該抗體結(jié)合抗原抗原的特異性。一個(gè)抗體分子上的兩個(gè)抗原結(jié)合部位是相同的,位于兩臂末端稱抗原結(jié)合片段(antigen-binding fragment, Fab)。"Y"的柄部稱結(jié)晶片段(crystalline fragment,FC),糖結(jié)合在FC 上。
          抗體的親和力 :
          是指抗體和抗原結(jié)合的牢固程度。親和力的高低是由抗原分子的大小、抗體分子的結(jié)合位點(diǎn)與抗原決定簇之間立體構(gòu)型的合適度決定的。有助于維持抗原抗體復(fù)合物穩(wěn)定的分子間力有氫鍵、疏水鍵、側(cè)鏈相反電荷基因的庫侖力、范德華力和空間斥力。親和力常以親和常數(shù)K表示,K的單位是L/mol,通常K的范圍在 108 ~1010 /mol,也有多達(dá) 1014 /mol??贵w親和力的測定對抗體的篩選,確定抗體的用途,驗(yàn)證抗體的均一性等均有重要意義。
          抗體(antibody)
          指機(jī)體的免疫系統(tǒng)在抗原刺激下,由B淋巴細(xì)胞或記憶細(xì)胞增殖分化成的漿細(xì)胞所產(chǎn)生的、可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白。主要分布在血清中,也分布于組織液及外分泌液中。
          一抗體和二抗體:
          一抗是針對抗原的抗體,二抗是針對一抗的抗體。即抗體也可以充當(dāng)抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體。
          *抗體就是我們平時(shí)所說的抗體,它能和抗原特異性結(jié)合。
          第二抗體是能和抗體結(jié)合,即抗體的抗體,其主要作用是檢測抗體的存在。

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