柱式細(xì)菌RNAout
產(chǎn)品及特點(diǎn) 本產(chǎn)品是天凈沙細(xì)菌RNAout （CAT#:51102）的柱式升級產(chǎn)品，用于快速從各種常見的革氏陰性和革氏陽性細(xì)菌中提取總RNA。跟細(xì)菌RNAout相比，它具有下列特點(diǎn):
1. 操作更加簡單快速，省去了zui費(fèi)時的離心步驟。
2. 所得RNA純度更高，OD260/OD280一般在2.0左右.
3. 一般不含基因DNA污染。
4. 適用于各種革氏陰性和革氏陽性細(xì)菌。
5. 性價比高于進(jìn)口同類產(chǎn)品。
規(guī)格及成分 成 份 50次包裝
溶液A 30 mL
溶液B 20 mL
離心吸附柱 50套
通用洗柱液 50 mL
RNA洗脫液 10 mL
使用手冊 1份

運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸，4℃保存，有效期一年。
自備試劑 。
使用方法 下面的操作步驟是針對在1.5 mL塑料離心管中進(jìn)行的微量提取的。
1. 新鮮配制裂解液。將溶液A和溶液B按1:1的比例混合。注意：溶液A和溶液B混合后必須立即使用，不要放置，否則會產(chǎn)生沉淀。一次處理1.5mL左右的細(xì)菌需要0.6mL新鮮配制的裂解液（即0.3mL溶液A和0.3mL溶液B的混合液）。
2. 在1.5 mL塑料離心管中離心收集0.2-1.5 mL新鮮細(xì)菌。注意:由于細(xì)菌RNA半衰期十分短，所以，必須使用鮮的、處于對數(shù)生長期的細(xì)菌。
3. 吸盡液體培養(yǎng)基，加入0.6mL新配制的裂解液，用槍充分吹打細(xì)菌沉淀，確保細(xì)菌全部裂解，沒有塊狀物。
4. 將裂解物轉(zhuǎn)移至一個干凈的1.5 mL塑料離心管中，然后加入0.2倍體積的自備（1 mL裂解物需0.2 ml），振蕩器上充分振蕩混均30秒。
5. 12000-15000 g室溫離心3-5分鐘。
6. 將上清液（約0.6-0.8 mL）轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。注意：離心后下層有機(jī)相和中間層含有DNA和蛋白質(zhì)，避免觸及，否則將產(chǎn)生蛋白質(zhì)和DNA污染。為保險起見，可以留下100 uL上清液不取。同時吸取上清時緩慢進(jìn)行，否則容易吸出交界面的不可見的絲狀DNA。
7. 12000-15000 g室溫離心半分鐘，棄收集管中的穿透液。
8. 加0.7 mL通用洗柱液到離心吸附柱中，室溫離心半分鐘，棄收集管中的穿透液。一次洗滌一般足夠去除雜質(zhì)。但如果樣品OD260/280比值不高，可以再用0.3 mL通用洗柱液重復(fù)此步一次。
9. 室溫12000-15000 g離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的通用洗柱液會影響RNA的使用。
10. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到一自備的RNase-free收集管中，加入50-100 uL RNA洗脫液。
11. 室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
12. RNA完整性的電泳檢測：如果需要做Northern雜交，強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行RNA電泳，因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的RNA分子（BioTechniques，28：414，2000）。
13. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定：將5-10 μL RNA溶于TE緩沖液中（pH7.5-8.2之間）檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度（1 OD260的RNA=40 μg/mL），進(jìn)而計算出RNA的產(chǎn)量（濃度X體積）和產(chǎn)率（RNA產(chǎn)量/組織用量）。
14. RNA純度測定：無污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之間（具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān)），高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響RT-PCR等反應(yīng)。