elisa酶聯(lián)免疫試劑盒本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人骨形成蛋白-7（BMP -7） 水平。用純化的人骨形成蛋白-7（BMP -7） 抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入骨形成蛋白-7（BMP -7） ，再與HRP 標(biāo)記的骨形成蛋白-7（BMP -7） 抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的
作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的骨形成蛋白-7（BMP -7） 呈正相關(guān)。用酶標(biāo)
儀在450nm 波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人骨形成蛋白-7（BMP -7）濃度。   
人骨形成蛋白-7（BMP- 7）elisa試劑盒組成   
1  30 倍濃縮洗滌液  20ml×1 瓶  7  終止液  6ml×1 瓶 
2  酶標(biāo)試劑  6ml×1 瓶  8  標(biāo)準(zhǔn)品（3200ng/L）  0.5ml×1 瓶 
3  酶標(biāo)包被板  12孔×8 條  9  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液  1.5 ml×1 瓶 
4  樣品稀釋液  6ml×1 瓶  10  說明書  1 份 
5  顯色劑 A 液  6ml×1 瓶  11   封板膜  2 張     
6  顯色劑 B 液  6ml×1/ 瓶  12  密封袋  1 個(gè) 
標(biāo)本要求   
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融 
2．不能檢測含 NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP ）活性。 
elisa酶聯(lián)免疫試劑盒操作步驟 
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。 
1600ng/L  5 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 
800ng/L  4 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 
400ng/L  3 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 
200ng/L  2 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 
100ng/L   1 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 
 
2.人骨形成蛋白-7（BMP- 7）elisa試劑盒加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，
然后再加待測樣品 10 µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。 
3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。       
4.配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用 
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此
重復(fù)5 次，拍干。 
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl，空白孔除外。   
7.溫育：操作同 3。 
8.洗滌：操作同 5。 
9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15分鐘. 
10.終止：每孔加終止液50µl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。 
11.測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。  elisa酶聯(lián)免疫試劑盒測定應(yīng)在加終止液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。